James Coleman
オプチマム 薄い テープ ニチバン8/22/2018
しかし、高齢の卵巣摘出雌マウスを用いた研究は、私たちが知る限りでは報告されていない. したがって、本発明者らは、24週中期卵巣摘出雌マウスを用いた皮膚創傷治癒に対する17-エストラジオールの効果を調べた. 20週齢の雌マウスを、卵巣摘出後の17-エストラジオール(OVX + 17-エストラジオール)、卵巣摘出(OVX)、および偽(SHAM)の3つの群に分けた。. 次いで、OVX + 17-エストラジオール群に0で17-エストラジオールを投与した. OVX + 17-エストラジオール群の創傷面積の割合は、OVX群のものと比較して有意に減少した. OVX + 17-エストラジオール群の好中球およびマクロファージの数は、OVX群のものより有意に小さかった. さらに、OVX + 17-エストラジオール群の筋線維芽細胞の割合は、OVX群のそれより有意に高かった. これらのデータは、外因性の連続的な17-エストラジオール投与が、創傷面積を減少させ、炎症反応を短縮し、創傷収縮を促進することにより、24週のOVX雌マウスにおける皮膚創傷治癒を促進することを示唆した. しかしながら、創傷治癒に対する外因性エストロゲンの影響が、高齢による創傷治癒の遅延を上回るかどうかは不明である. 皮膚創傷治癒は、時間的および空間的レベルで注意深く調整された、損傷に対する複雑で緊密に調整された応答である . 一般に、修復プロセス(即時応答;炎症応答;増殖、移動および収縮期;およびリモデリング段階)の様々な重複段階が存在し、 .
オプチマム 薄い テープ ニチバン たばねらテープ高齢のヒトでは、急性創傷の治癒遅延は、炎症の延長、プロテアーゼ活性の増加、および再上皮化の遅延を特徴とする . しかし、エストロゲンを全身的に減少させた閉経後女性は、貧弱に治癒するが、外因性エストロゲン治療は、過剰な好中球動員を弱め、再上皮化を促進し、コラーゲン沈着を増加させることにより、 . 卵巣摘出術を受けた齧歯類モデル(OVX)は、エストロゲンの効果および詳細な生物学的メカニズムの解明の基礎となる. OVXはSHAMと比較して遅延した皮膚創傷治癒を示したが[5,6,8,14]、外因性エストロゲン治療は創傷面積を減少させることによってこの遅延を逆転させた[5,8,12 14]、好中球およびマクロファージの局所数[8,12,14] 、およびTNFの創傷レベル[8]、ならびに再上皮化を促進すること[5,9,11,14]およびコラーゲン沈着 . しかし、エストロゲンの影響を評価するこれらの研究では、10匹の若い雌マウス8匹を使用し、老齢の雌マウスを用いた研究は、我々の知る限りでは報告されていない. 皮膚創傷治癒に関連する高齢と外因性エストロゲン治療との関係は未知であるため、我々は古いOVX雌マウスモデルを用いた皮膚創傷治癒に対するエストロゲンの効果を検証しようとここで試みる. 本発明者らは、24週間の中年のOVX雌マウスを用いた皮膚創傷治癒に対する17-エストラジオールの効果を調べる. 本研究の目的は、24週齢の中年のOVX雌マウスにおける皮膚創傷治癒を促進する17-エストラジオールの投与および皮膚創傷治癒にどのような影響を及ぼす因子がエストロゲンまたは年齢であるかを評価することである. 動物8週齢のC57BL / 6雌マウス3組(Sankyo Lab Service Co. 実験プロトコールおよび動物のケアは、金沢大学の実験動物のケアおよび使用のためのガイドライン(AP-122316)に従い、. この時点で、ペントバルビタールナトリウム(0)の腹腔内(IP)注射により麻酔をかけた. その後、OECDのガイドラインに従って、偽手術(SHAM)または卵巣摘出(OVX)を受けた .オプチマム 薄い テープ ニチバン ナイスタック4週間後、それらを3群(21匹のマウス/群):SHAM群、OVX群、およびOVX + 17-エストラジオール群に分けた. 次いで、剃毛麻酔下で、マウスの背の両側に皮弓筋を含む2つの円形全層皮膚創傷(直径4mm)を、Kai滅菌使い捨て生検パンチ(Kai Industries Co.. SHAMおよびOVX群では、湿った環境を維持するために傷を親水性包帯(Meshpore Tape; Nichiban、Tokyo、Japan)で包んだハイドロコロイドドレッシング(Tegaderm; 3M Healthcare、Tokyo、Japan). それを1mL注射器を用いて清潔なガーゼ上に置き、毎日創傷を避けて背中の皮膚に適用した. 巨視的観察創傷が形成された日を0日目とし、創傷治癒の過程を創傷後0日目から14日目まで観察した. シート上のトレースは、Adobe Photoshop Elements 7を使用してスキャナでパーソナルコンピュータに取り込まれた. 02(Scion Corporation、Frederick、Maryland、USA). 創傷領域は、創傷が形成されたときの0日目の最初の創傷領域に対する毎日の創傷領域の割合として示される. 我々の以前の研究では、蜂蜜、ダイゼイン、エストロゲンの投与などの管理をしていないマウスの背部の全層皮膚創傷が、創傷後約14日目に瘢痕形成を治癒し、の創傷面積の約0に達した. 血漿17-エストラジオールアッセイおよび子宮アッセイ14日目にマウスを大量のペントバルビタールナトリウムIP注射によって安楽死させた. 心臓穿刺により単離した各マウスの血液から血漿を調製し、アッセイの時点まで凍結させた. 血漿17-エストラジオールレベルは、ラジオイムノアッセイ(RIA)によって測定され、10pg / mL未満のレベルは検出できなかったので、そのようなレベルは10pg / mL. これをこのアッセイの製造業者(三菱化学メディエンス株式会社、東京、日本)に外注した。. 血液分離後のOECDガイドラインに従って子宮を収穫し、その湿重量を測定し、4%パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋した.オプチマム 薄い テープ ニチバン ナイスタック血漿TNF-マウスを、3日目および7日目に大量のペントバルビタールナトリウムIP注射によって安楽死させた. 心臓穿刺により単離した各マウスの血液から血漿を調製し、アッセイの時点まで凍結させた. 血漿TNF-レベルは、ELISA(R&D Systems、Tokyo、Japan)によって製造業者のガイドラインに従って決定した. 組織学的手順および免疫組織学的染色マウスを、創傷後3,7,11および14日目に大量のペントバルビタールナトリウムIP注射によって安楽死させた. 創傷および周囲の無傷の皮膚を収穫し、創傷および周囲の無傷の皮膚の各サンプルを創傷中心部で二等分した. 各創傷の半分をポリプロピレンシート上にステープル留めして、サンプルの過剰収縮を防ぎ、4%パラホルムアルデヒド中で12時間固定した. これらの試料をアルコール系列で脱水し、キシレンで洗浄し、パラフィンに包埋して5mのパラフィンパラフィン切片を調製した. 残りの各創傷を組織-Tek OCT(Sakura Finetek、Japan)に固定して固定し、5mの連続氷切片を作製した. 1つの創傷から創傷の中心付近の少なくとも6つの連続切片を得て、以下の方法に従って染色した. ヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)で染色したか、またはアザン染色し、抗好中球抗体を1:100の濃度で免疫組織学的に染色した(Abcam Japan、Tokyo、Japan)マクロファージを検出するための1:100の濃度のMac-3抗体(BD Pharmingen、Tokyo、Japan)および厚さ5μmの凍結切片を、1の濃度の抗平滑筋アクチン(-SMA)抗体で免疫組織学的に染色した:500(Abcam Japan、Tokyo、Japan)、筋線維芽細胞の検出用. 顕微鏡観察デジタル顕微鏡カメラ(DP2-BSWオリンパス、日本)を用いて画像をコンピュータに取り込み、. 再上皮形成が欠如している割合の測定は、DP2-BSW Olympusソフトウェアを使用して行った:両創端間の距離および細長い新しい上皮の先端間の距離を測定し、後者を前者で除した(再上皮化なし長さ/創傷の長さ). Adobe Photoshop Elements 7を用いて、青色のコラーゲン沈着(コラーゲンピクセル/総創傷ピクセル)および褐色に染色された筋線維芽細胞(筋線維芽細胞ピクセル/総創傷ピクセル)の測定を行った. 0とした。創傷領域を最初に選択した。一方の傷縁、傷の表面、他方の傷の縁、および皮の甲皮の位置である傷の底を取り囲み、囲まれた領域(=創傷の領域)の画素の数は計算された. 次に、青または褐色に着色したコラーゲン沈着を選択し、青または茶色領域のピクセル数(コラーゲン沈着の面積または筋線維芽細胞の面積)を計算した。最後に、コラーゲン沈着の領域のピクセル数または筋線維芽細胞の領域のピクセル数を、創傷領域のピクセル数で割った. 造粒組織中の好中球およびマクロファージの数を分析するために、各陽性細胞を、3つの造粒組織の部位、すなわち2つの創傷端の近くの2つの部位および肉芽組織の中心部を用いて40対物レンズを用いた光学顕微鏡による観察によって計数した.オプチマム 薄い テープ ニチバン 違いこれらの3つの部位の領域をDP2-BSWのモニター上で計算し、3つの部位における好中球またはマクロファージの総数をこれらの3つの部位の全領域で割った. フィッシャーの正確確率検定、ANOVA、およびスチューデントs検定またはTukey-Kramer多重比較検定を実施した. 子宮重量および血漿17-エストラジオールレベル我々は、OVXおよびOVX + 17-エストラジオール群で卵巣が正常に除去されたことを確認した. OVX + 17-エストラジオール群の子宮重量は、14日目にSHAMおよびOVX群の子宮重量より有意に大きかった. OVX + 17-エストラジオール群の血漿17-エストラジオールレベルは、14日目のSHAMおよびOVX群のレベルよりも有意に高かった. OVX群では、6匹のマウスのうち4匹が10μg/ mL未満の血漿17-エストラジオールレベルを有し、SHAM群では、1日目にSHAMとOVX群との間に有意差はなかった(表1) 6匹のマウスが行った. SHAM群では、安楽死させる前にSHAMマウスの塗抹標本を観察した際に、エストロスおよびプロストラスは観察されなかった. 他方、OVX + 17-エストラジオール群では、それは肥大性および新鮮性であった. そうでなければ、OVX + 17-エストラジオール群では前卵巣が示され、子宮腔が拡張された. 創傷領域SHAM群では、創傷領域は2日間増加し、その後8日まで急速に減少し、その後14日までゆっくりと減少した(14日目の創傷領域対創傷領域の比). OVX群では、創傷領域は2日間増加し、その後9日まで急速に減少し、その後14日までゆっくりと減少した(図2). 一方、OVX + 17-エストラジオール群では、創傷面積は1日のみ増加し、次いで11日目まで急速に減少し、その後14日目まで緩やかに減少した(図2). OVX + 17-エストラジオール群の創傷面積の比は、OVX群のそれに比べて、4日目および11日目(0. OVX + 17-エストラジオールとSHAM群との間、またはSHAM群とOVX群との間の創傷面積の割合は、14日目に有意差がなかった.オプチマム 薄い テープ ニチバン ヘン品しかし、OVX群の平均創傷面積の割合は、最初の日を除いて全期間を通じてより大きかった(図2(b)). SHAM群とOVX群、OVXとOVX + 17-エストラジオール群(および0群)の間で有意差が認められた. OVX + 17-エストラジオールとOVX群との間には、4日目および11日目に有意差があった. しかし、SHAM群とOVX群、またはSHAM群とOVX + 17-エストラジオール群との間に有意差はなかった. 値は、各群、ANOVA、Tukey-Kramer、:OVX対OVX + 17-エストラジオール. 好中球、マクロファージおよび血漿TNF-レベルOVX + 17-エストラジオール群の好中球の数は、3日目のOVX群のそれより有意に小さかった(). OVX + 17-エストラジオールとSHAM群、またはSHAM群とOVX群との間には3日目に有意な差はなく、7日目(図3(a))では有意差がなかった. 好中球の数は、OVXおよびOVX + 17-エストラジオール群で3日目から7日目に有意に減少した(および0. OVX + 17-エストラジオール群の好中球の数は、3日目のOVX群のそれより有意に小さかった. (b)3日目および7日目に創傷組織に抗好中球抗体で染色された好中球(矢印)が観察された. OVX + 17-エストラジオール群のマクロファージの数は、3日目のOVX群のそれより有意に小さかった. (d)抗Mac-3抗体で染色されたマクロファージ(矢印)が、3日目および7日目に創傷組織に観察された. 値は、各群、ANOVA、t検定、またはTukey-Kramerの平均SDとして表す; 、:OVX対OVX + 17-エストラジオール. OVX + 17-エストラジオール群のマクロファージ数は、3日目のOVX群のマクロファージ数よりも有意に少なかった(). OVX + 17-エストラジオールとSHAM群、またはSHAM群とOVX群との間には3日目に有意差はなく、7日目(図3(c))では有意差がなかった. マクロファージの数は、OVX群で3日目から7日目に減少したが、SHAMおよびOVX + 17-エストラジオール群では変化しなかった.オプチマム 薄い テープ ニチバン たばねらテープ3および7日目の3つの群の間に血漿TNF-レベルの有意差はなかった(図3(e)). SHAMおよびOVX + 17-エストラジオール群における血漿TNF-レベルは、3日目から7日目に減少し、OVX + 17-エストラジオール群で有意な減少を示したが、OVX群では変化しなかった. 再上皮化、コラーゲン沈着および創傷収縮3日目に、創傷端から新たな上皮が出現した. 11日目までに、新しい上皮がOVX + 17-エストラジオール群の創傷表面を完全に覆ったが、5つの創傷のうちの1つは、SHAMおよびOVX群では完全には覆われなかった. 3つの群の間に有意差はなかったが、OVX + 17-エストラジオール群のそれは、7日目および11日目のOVX群のものと比較して増加する傾向があった. OVX + 17-エストラジオール群の筋線維芽細胞の割合は、11日目のOVX群のそれと比較して有意に増加した. しかし、OVX + 17-エストラジオールとSHAM群またはSHAM群とOVX群との間に有意差はなかった. バー500m(SHAM)、1000m(OVX)、および200m(OVX + 17-エストラジオール). 値は、各群、ANOVA、Tukey-Kramerについての平均SDとして表す; :OVX対OVX + 17-エストラジオール. OVX + 17-エストラジオール群では7日目および11日目(および0日目)にOVX群のそれよりも大きい傾向があった. 11日目までに、3つの群の肉芽組織で多くの筋線維芽細胞が観察され、橋状構造を構築した. OVX + 17-エストラジオール群の筋線維芽細胞の割合は、11日目のOVX群のそれより有意に大きかった(). しかし、OVX + 17-エストラジオールとSHAM群、またはSHAM群とOVX群との間には、7-14日目に有意差はなかった(図4(e)). 考察本研究では、OVX + 17-エストラジオール群の創傷面積の比は、創傷後4日目および11日目の時点でOVX群のそれより有意に小さかった. これは、外因性の連続した17-エストラジオール投与が、20週のOVX雌マウスにおける創傷面積の減少に有効であることを示す.オプチマム 薄い テープ ニチバン たばねらこれは、OVXマウスの皮膚創傷治癒が創傷面積の減少を介して外因性エストロゲン治療によって促進されるという以前の研究と一致する[5,8,12 14]. 一方、本研究では、創傷面積の割合は、SHAMとOVX + 17-エストラジオール群との間で有意差はなかった. SHAMマウスの皮膚創傷治癒が8週齢の17-エストラジオールを投与したOVXマウスと比較して遅れていないことをはっきりと示さないが、以前の研究論文のグラフからも同様の結果が推測される[9]. また、本研究では、SHAM群とOVX群では創傷面積の割合に有意差は認められなかった. これは、OVXマウスの皮膚創傷治癒がSHAMマウスと比較して遅れたという以前の研究と矛盾する[5,6,8,14]. SHAM群の現在の研究における創傷後14日目の1日目は、OVX群のそれより有意に大きかった. これは、SHAMマウスにおける皮膚創傷治癒が、生理学的エストロゲンによるOVXマウスにおけるものと比較して促進されることを示す. これらの知見から、OVXマウスにおける皮膚創傷治癒が最も遅れており、外因性の連続した17-エストラジオール投与を伴うOVXマウスにおける皮膚創傷治癒が最も促進され、SHAMマウスにおける皮膚創傷治癒はこれらの間の中間であると推定される2つのグループ. これらの知見は、外因性の連続した17-エストラジオール投与が、発情と共に変動する天然の生理学的17-エストラジオールよりも皮膚創傷治癒に有効であることを示している . 本研究におけるOVX、SHAMおよびOVX + 17-エストラジオール群の皮膚創傷治癒におけるこれらの相違は、必ずしも現在の結果:再上皮化の比、好中球およびマクロファージの数、TNF-αのレベル、 、および筋線維芽細胞およびコラーゲン沈着の比率. 以前の研究者らは、OVX後の17-エストラジオールおよび外因性の連続した17-エストラジオール投与の生理学的レベルが、再上皮化を促進することにより皮膚創傷治癒を促進し、好中球およびマクロファージの局所数を減少させることを報告した[ 14]ならびにTNFの創傷レベル[8]、およびコラーゲン沈着促進 .オプチマム 薄い テープ ニチバン ナイスタックは、生理学的レベルの17-エストラジオールを有する野生型マウスと比較して、OVXマウスからの7日目の創傷組織において平滑筋作用(SMA)が減少したことを報告している . 一方、本研究では、OVX群とOVX + 17-エストラジオール群との間にのみ有意差があったが、OVX + 17-エストラジオール群の好中球およびマクロファージ数は、OVX群のそれよりも有意に少なかった3であり、OVX + 17-エストラジオール群における筋線維芽細胞の比率は、11日目にOVX群のそれより有意に増加したが、コラーゲン沈着および再上皮化の比率またはOVX間のTNF-のレベルに有意差はなかったおよびOVX + 17-エストラジオール基. これらの知見は、外因性の連続した17-エストラジオール投与が、創傷領域について議論したように、発情周期の過程にわたって変動する天然の生理学的エストロゲンよりも有効であることを示し得る. なぜOVXマウスとSHAMマウスの間に有意差はなかったのですか?以前の研究では、外因性17-エストラジオール投与によるOVX、SHAMおよびOVXの比較において、8匹の10週齢の若い雌マウスを用いた皮膚創傷治癒に対するエストロゲンの影響を評価した. 若い雄のマウスに比べて、老齢の雄のマウスの皮膚創傷治癒が創傷面積を延ばすことによって遅れることを実証した . HardmanおよびAshcroftは、差次的に発現される遺伝子の78%がエストロゲン調節されていたのに対して、3%のみが年齢関連性であったことをマイクロアレイ研究から報告した . 本研究の結果は、外因性の連続した17-エストラジオール投与が皮膚創傷治癒に影響を及ぼすが、生理的エストロゲンを伴うSHAM群の皮膚創傷治癒への影響は、その効果の中間的なようであるため、年齢の影響は無視できないことを示唆するのOVXおよびOVX + 17-エストラジオール基. したがって、我々は、より古いマウスモデルを用いてさらなる研究を行い、近い将来に17-エストラジオールおよび高齢が皮膚創傷治癒に及ぼす影響を評価しようとする. 結論本発明者らは、外因性の連続した17-エストラジオール投与が皮膚創傷治癒中の創傷面積、炎症細胞および筋繊維芽細胞に有益な効果を有することを明らかにした. したがって、本発明者らの研究は、外因性の連続した17-エストラジオール投与が、創傷面積を縮小し、炎症反応を短縮し、創傷収縮を促進することにより、24週のOVX雌マウスにおける皮膚創傷治癒を促進することを示唆する. しかし、創傷治癒に対する外因性の連続的な17-エストラジオール投与の効果が、高齢による創傷治癒の遅延を上回るかどうかは不明である.
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